Genetyczne przyczyny wad nerek w zespole DiGeorge ad 8

W 21 tygodniu CRKL wykryto tylko w kanalikach proksymalnych i zbierających kanaliki po stronie szczytowej komórek nabłonka (ryc. S11B w dodatku uzupełniającym). W nerce 1,5-letniego chłopca obserwowaliśmy obfite ekspresje CRKL w kanalikach proksymalnych i zbierających po stronie wierzchołkowej, wraz z dyfuzyjną sygnalizacją cytoplazmatyczną w kłębuszkowych komórkach śródbłonka, podocytach, kapsule Bowmana i dystalnych kanalikach (Fig. S11C w Dodatku Uzupełniającym). Ekspresja SNAP29 i AIFM3, chociaż obecna na bardzo niskich poziomach w prądzie zadefisha (nie pokazano), była obserwowana w drogach moczowych u płodów i dzieci (Ryc. S12 i S13 w Dodatku Uzupełniającym). Rysunek 3. Rysunek 3. Lokalizacja Crkl w rozwoju dróg moczowych u myszy i danio pręgowanego i fenotypów myszy z knoksem Crkl.Panel A pokazuje immunobarwienie dla Crkl w nerce otrzymanej od myszy transgenicznej w dniu embrionalnym E15.5, w którym znakowano Six2 ze wzmocnionym zielonym białkiem fluorescencyjnym (GFP), z konkretnym wybarwianiem pąków moczowodu pączków moczowodu (na czerwono) w otoczeniu komórek mezenchymatycznych z numerem dodatnim Six2 (na zielono) (podpanel a). Powiększone pole pokazuje rozgałęzienie moczowodu w obrębie kondensującego się mezenchymicznego mezenchymicznego (podpanel b). Panel B pokazuje swoistą ekspresję wyrostka rykowego u danio pręgowanego, co wykazano przez kolokalizację po barwieniu przeciwciałem przeciwko ATPazie potasowo-sodowej. W symbolu orientacji D oznacza grzbietową, V brzuszną, C ogonową i Ropral. Panel C pokazuje obrazy kontroli ujemnych (tj., Ryby traktowane tylko wtórnymi przeciwciałami skoniugowanymi z fluoroforami). W panelach B i C paski skali reprezentują 100 .m. W modelu mysim, który jest skierowany na ekson Crkl 2, stworzono trzy krzyże z transgenicznymi myszami rekombinazy Cre w celu wywołania delecji egzonu 2 w określonych przedziałach: E2a-Cre dla globalnego nokautu, Six2-Cre w mezenchymie czapeczki i Hoxb7 w struktury pochodzące z pąków moczowodowych. Panel D pokazuje tkankę myszy Six2-Cre, w której powieleniu prawej nerki towarzyszy nieregularny, dysplastyczny wzór lub pączek moczowodu rozgałęziony w dniu embrionalnym E15.5. Panel E pokazuje tkankę myszy E2a-Cre, w której pojedynczej nerce z duplikowanymi moczowodami (groty strzałek) towarzyszy niepowodzenie rozwoju brodawek rdzeniowych i nerkowych w dniu E14.5. Panel F pokazuje tkankę myszy Six2-Cre, w której nerka jest hydronetrotyczna z rozszerzoną miednicą, brak budowy rdzeniastej i kilka mikrorystycznych kłębuszków i kanalików w dniu E15.5.
W nerce myszy w dniu embrionalnym E15.5, Crkl wykazywał swoistą ekspresję w strukturach pochodzących z moczowodu i czasami w ciałach w kształcie litery S i rozwijających się kanalikach proksymalnych (Figura 3A i Fig. S14 w Dodatku Uzupełniającym). U danio pręgowanego, chrząszcz był specyficznie wyrażany w pronephros (ryc. 3B i 3C). Badania RNA, które przeprowadzono przy użyciu cytometrii przepływowej i sortowania komórek, wraz z hybrydyzacją in situ, potwierdziły, że crkl był wyrażany w kanalikach moczowo-mózgowych z kanalikami pronaturalnymi (ryc. S15 i S16 w dodatku uzupełniającym).
Na koniec opracowaliśmy model myszy, który jest ukierunkowany na ekson Crkl 2. Wytworzyliśmy trzy różne krzyże z transgenicznymi myszami rekombinazy Cre, aby przeprowadzić delecję egzonu 2 w określonych przedziałach: E2a-Cre dla globalnego nokautu, Six2-Cre w mezenchie czapeczki, i Hoxb7 w strukturach moczopędnych pochodzących z pączków
[hasła pokrewne: dentysta ursynow, curaprox enzycal, objaw trousseau ]

Powiązane tematy z artykułem: curaprox enzycal dentysta ursynow objaw trousseau