Identyfikacja genów dla metabolizmu witaminy B12 cblD ad

Wewnątrz komórki przekształca się w dwa aktywne kofaktory: adenozylokobalaminę i metylokobalaminę (ryc. 1) .1 Adenozylokobalamina jest koenzymem dla mitochondrialnej mutacji metylomalonylo-koenzymu A, która przekształca L-metylomalonylo-koenzym A w sukcynylo-koenzym A i bierze udział w katabolizm kwasów tłuszczowych o łańcuchach nieparzystych i niektórych aminokwasów. Metylokobalamina jest koenzymem cytosolowej syntazy metioninowej, która przekształca homocysteinę w metioninę i jest niezbędna do normalnego metabolizmu jednego węgla, który z kolei bierze udział w ważnych procesach komórkowych, takich jak metylacja i synteza DNA.1. Zakłócenia syntezy kobalamin-kofaktorów spowodowane nabyciem lub zmiany dziedziczne powodują podwyższenie poziomu homocysteiny i kwasu metylomalonowego, które są związane z wielonarządowymi nieprawidłowościami klinicznymi podobnymi do obserwowanych u pacjentów z ciężkim niedoborem witaminy B12, w tym letarg, hipotonia, opóźnienie rozwoju, napady padaczkowe i niedokrwistość megaloblastyczna. Wrodzone błędy syntezy kobalamin-kofaktorów stanowią niejednorodną i ważną grupę rzadkich zaburzeń. Wewnątrzkomórkowy metabolizm kobalaminy obejmuje wiele etapów między lizosomalnym uwalnianiem kobalaminy i syntezą adenozylokobalaminy w mitochondriach i metylokobalinie w cytozolu. Do chwili obecnej dziewięć wyraźnych defektów tego szlaku zostało zdefiniowanych in vitro za pomocą somatycznej analizy komplementarnej. Tak zidentyfikowane grupy dopełniacza zostały oznaczone jako cblA, cblB, cblC, cblD, cblE, cblF, cblG, cblH i mut (ryc. 1) .2,3 Odpowiedzialne geny są znane z wyjątkiem cblD, cblF i cblH, chociaż funkcja niektórych powiązanych białek nie jest jasna. Zaburzenia cblC i cblF powodują skojarzone homocystynuria i kwaśne moczary metylomalonu; cblA, cblB, cblH i mut powodują wydzieloną kwasowość metylomleczową; a cblE i cblG powodują wyizolowaną homocystynurię. Wada cblD (Online Mendelian Inheritance in Man number, 277410) 2 jest zastanawiająca, że niektórzy pacjenci połączyli acidurię metylomalonową i homocystynurię (zwaną cblD original przez Suormala i wsp.2, ale tutaj nazywani cblD-combined ), niektórzy mają tylko wyizolowane homocystynuria (zwane wariantem CblD 1 2 lub, tutaj, cblD-homocystynuria ), a inne mają tylko kwasuromię metyloomalonu ( wariant CblD 2 2 lub tutaj, kwasowanie CblD-metylomalonowe ). Tutaj opisujemy naszą identyfikację genu cblD, potwierdzenie jego tożsamości za pomocą badań biochemicznych i molekularnych oraz demonstrację istotnych funkcjonalnie mutacji u pacjentów z defektem cblD.
Metody
Pacjenci i linie komórkowe
Badanie przeprowadzono w latach 2004-2007. Zbadano siedem niespokrewnionych pacjentów z defektem cblD. Pisemną świadomą zgodę uzyskano od rodziców każdego pacjenta, a pacjenci, którzy mogli wyrazić zgodę, zrobili to. Badanie zostało zatwierdzone przez lokalny komitet etyczny.
Hodowlę fibroblastów skóry uzyskano dla celów diagnostycznych, a lekarze kierujący zaaprobowali użycie próbek do naszego badania pochodzenia choroby. Unieśmiertelniliśmy fibroblasty za pomocą plazmidu pRNS14 i elektroporacji (Gene Pulser II, BioRad). Immortalizacja nie wpłynęła znacząco na funkcje komórkowe (dane niepokazane).
Funkcjonalną integralność szlaku metylomalonowo-kwasowego oceniano przez pomiar stopnia wbudowania propionianu [14C] w makromolekuły i tworzenie adenozylokobalaminy z [57C] cyjanokobalaminy, jak opisano poprzednio2. Określono integralność syntazy metioninowej w szlaku homocysteiny. jak powstawanie metioniny z mrówczanu [14C] i synteza metylokobalaminy z [57Co] cyjanokobalaminy.2
Somatyczna analiza komplementacji2 potwierdziła, że wszystkie linie komórkowe fibroblastów od pacjentów należały do grupy cblD (w tym jednej, która była używana do definiowania cblD5)
[patrz też: afronis opinie, konspekt treningu piłki nożnej seniorów, glamid żel ]

Powiązane tematy z artykułem: afronis opinie glamid żel konspekt treningu piłki nożnej seniorów